液相色谱仪常见故障解析：“堵”与“漏”的预防与解决

液相色谱仪操作易学难精，其性能高度依赖“正确使用”和经验积累。流动相是液相色谱工作者接触最多、也最易引发问题的环节。HPLC系统最常见的故障是“堵”和“漏”。

一、 液相色谱仪为何会“堵”

液相色谱仪“堵”表现为柱压异常升高，核心是流路不畅，多发于色谱柱前端。流动相杂质（主要是细菌）是主因。

堵因一：纯水细菌污染

问题： 国产甲醇通常无需额外过滤，固态杂质可由系统前端过滤头拦截。致命威胁是水中的细菌。新制纯水放置数日即长菌，堵塞柱填料空隙，导致液相色谱柱快速报废。

解决：保障水质可靠

理想方案： 购置实验室专用纯水机。

经济方案： 购买市售纯净水（如怡宝、娃哈哈500ml）。随机抽检细菌平板合格后使用，单次成本低。

关键点：水质可靠可省过滤！ 

原因：

流动相过滤操作易致交叉污染（尤其复杂配比）。

过滤成本高（装置易损，滤片昂贵，长期成本远超色谱柱）。

堵因二：流动相使用中的细菌污染

问题： 使用多元液相色谱仪时，习惯在流路A放纯甲醇，流路B放纯水（或缓冲盐）。此方式虽简便、比例准，但致命缺陷是水相（尤其缓冲盐）易在瓶中快速长菌，严重损害色谱柱。要求每次用新水并实验后彻底冲洗，但易遗漏。

解决：避免纯水流动相！牺牲少许保留时间重复性，不要单独使用纯水或缓冲盐作为流动相组份。

推荐：用10%甲醇水代替纯水。 (实验证实：≥5%甲醇水可抑菌，≥10%可完全杀菌)。既能作流动相，也可用于冲洗液相色谱柱，一劳永逸防菌。

堵因三：操作不当

更换部件型号/接口不匹配，拧紧时变形堵塞。

样品处理液净化不彻底，长期积累堵塞六通阀与柱间管路。

手动六通阀转动不到位，形成死堵。

废液管（尤其金属管）出口暴露空气，缓冲盐结晶堵塞（较少见但可能）。

查堵方法：

系统通常仅一处堵塞。从检测器端向泵端逆向分段拆卸部件（色谱柱除外），观察压力变化。部件装上/拆下压力差显著者即为堵点。色谱柱堵塞可通过更换同规格柱对比压力判断。

溶剂入口过滤头：未过滤溶剂或溶剂瓶长菌会降低其寿命，影响液相色谱仪泵性能。建议每3个月清洗/更换。检查：拔下入口管，若溶剂自由滴出则正常；若堵塞则无/极少滴液。禁用超声清洗（可能导致玻璃滤芯破碎）。

二、 液相色谱仪为何会“漏”

液相色谱仪“漏”分两种：漏液（内部液体外泄）和漏气（外部气体进入形成气泡）。

液相色谱仪漏液：

原因一：液相色谱仪硬件接触不当

液相色谱仪更换管路或色谱柱时，接头接口不匹配。不同品牌/时期色谱柱接头差异大。

推荐方案：使用PEEK接头。 通用性好，手拧即可有效防漏。

匹配接口操作不当：过紧、过松或“滑丝”（需加强基本功）。

原因二：液相色谱仪使用不当

使用缓冲盐流动相后，未及时用甲醇水冲洗系统，残留液干燥结晶导致微渗（常见于泵）。

注意： 泵微渗通常可冲洗后观察使用；检测器漏液（多为流通池问题）维修成本高。

液相色谱仪漏气（气泡问题）：

2.1 过滤头： 流路管持续不规则小气泡。

可能流动相未彻底脱气（即使有在线脱气机，超声预处理仍有益），或过滤头污染。

处理：拧下浸泡稀硝酸，超声半小时，洗净装回。

2.2 泵前透明流路管： 长期停用导致管路液体干涸充满空气（不易察觉），泵空转会拉伤活塞杆（尤其残留盐分时）。

预防关键！ 确保液相色谱仪每周至少开机运行一次（最好有实验），或至少冲洗流动相2小时。人员稳定，养成良好习惯。

已进气处理（外力填充法）：

拧下泵入口接头。

用洗耳球尖端对准管口，吸液至液面接近洗耳球（约5cm）。

快速拧回接头。

开机，开排液阀启动泵，待排液无气泡后关闭排液阀。

2.3 泵与色谱柱： 进入气泡一般易冲洗掉。

2.4 检测器： 气泡在基线上表现为间隔的直上直下大峰。常规流量冲不走时，需拆柱，将检测器直接连泵出口，大流量冲洗。

   正确维护流动相水质、避免单独水相、规范操作、定期运行/冲洗是保障液相色谱仪稳定运行、减少“堵”“漏”故障的关键。预防远胜于维修！